华山松大小蠹材料和方法

2008年8月,选取华山松大小蠹的新侵木为研究对象(针叶部分失绿,树皮表面有少许凝脂漏斗,韧皮部和木质部颜色正常,部分侵入孔里面的木质部有蓝变现象,树干有侵入孔的地方有树脂流出)[13]。采用www.gsmmp.com随机抽样选择5株华山松新侵木,从侵入孔用小刄将树皮慢慢割开,沿着坑道拨开树皮。用镊子将华山松大小蠹夹出,放入预先准备的广口瓶中,迅速放入装有冷冻液的保温箱中;在坑道内将颜色鲜艳并www.sdbljd.com 带有粘稠状的新鲜粪便取出,用保鲜膜包好,一并放入保温箱中。

参照Diaz等[22]关于红脂大小蠹的结果确定其前肠、中肠、后肠和胃盲肠的位置。将成虫从冰箱取出,立即解剖,切下其后肠和相关组织,包括一部分中肠、马氏管和一些脂肪体,放入装www.hbyybc.com 有1. 5mL的冷却的正己烷的离心管中。每个采样瓶装40根后肠,放入冰箱冷却保存(4e),其中雌虫和雄虫分别采样。将采集到的雌雄小蠹虫粪便(混合物),用分析天平称取10 g,加入20mL冷却正己烷中,阴凉处静置24 h,过滤www.sdmpjd.com 其中的杂质,将上清液移到1. 5mL离心管中,冷藏待用。

样品测定:采用直接进样法对华山松大小蠹雌雄虫后肠和粪便提取物进行GC-MS分析。GC条件,TRACE DSQ GC-MS联用仪(美国Finnigan公司);DB217MS(30m@0. 25mm@0. 25Lm),弹性www.sdyxsmp.com 石英毛细管柱,程序升温40e,保持2. 5min;以6e/min升至240e,保持10 min;进样口250e;传输线230e;载气为He,流速1. 0mL/min。10B1分流进样。MS条件, EI源, 70 eV;离子源温度250e,质量扫描范围35~400 amu;发射电流100LA,检测电压1.4 kV。质谱标准库:NIST库。

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